Trimscope
TriMScope signifie Multifocal Multiphoton Microscopy. Il s'agit d'un microscope possédant plusieurs point focaux simultanément et dont l’excitation infrarouge pulsée femtoseconde permet une excitation multi-photonique. Ce système est commercialisé par LaVision BioTec.
Il est particulièrement utilisé pour étudier la fluorescence des cellules vivantes. La fluorescence en microscopie est l'un des outils pour l'étude des processus biologiques. Pour l’utiliser, il faut posséder un laser à impulsion brève, un microscope et une caméra. Il est constitué d'un multiplicateur de faisceau breveté par LaVision BioTec et d'un scanner. Le laser infrarouge utilisé avec des impulsions de l'ordre de la femtoseconde, permet l'absorption simultanée de deux photons. Cette technique a plusieurs avantages puisqu'elle est naturellement confocale et que le laser possède une meilleure pénétration en milieu diffusant.
Le système possède des caractéristiques intéressantes en termes de vitesse d’acquisition, de résolution et de pénétration des tissus. Comparé aux autres techniques comme la microscopie confocale, la possibilité d’avoir une excitation multifocale diminue le temps d’acquisition sans dégradation de l’échantillon. De même, contrairement au confocale, il est possible de visualiser directement dans le microscope l'image bi-photonique de la fluorescence provenant des échantillons étudiés.
Comme nous venons de le dire le TriMScope est un appareil révolutionnaire avec une zone d'étude variable et un fort débit optique. Il possède donc de multiples applications pour le domaine biologique, grâce aux sondes fluorescentes :
• fluorescence en 3D sur des cellules vivantes
• suivi dynamique de processus biologiques en cellules vivantes
• étude d'embryon
L'objectif donc de ce système est d'avoir une excitation confocale, c'est-à-dire pas de fluorescence en dehors du volume focale, en mode plein champs.
La microscopie biphotonique conventionnelle utilise le balayage galvanométrique d’un unique faisceau laser (comme les microscopes confocaux). Ce balayage peut être trop lent pour l’imagerie de fluorescence de tissus vivants. Un développement choisi au laboratoire consiste en un dispositif qui sépare le laser jusqu'à 64 faisceaux pour obtenir une excitation multifocale.
Le dispositif de division du faisceau incident permet d’observer l’échantillon avec 1, 2, 4, 8, 16, 32 ou 64 faisceaux. Cela présente deux avantages majeurs la rapidité d’acquisition des images et une diminution de la photo blanchiment. Suivant les besoins de l’utilisateur, le TRIMSCOPE est couplé à un microscope droit ou inversé classique. Plusieurs types de caméras sont proposés pour la détection. Pour travailler avec un faisceau unique, en microscopie bi-photon classique, il est possible d’installer un jeu de PMT en réflexion et en transmission.
En résumé, cette technique unique fourni jusqu’à 64 fois plus de fluorescence dans la même unité de temps, comparé aux dispositifs simple faisceau. Le TriMScope permet un taux
d’armature élevé pour une basse puissance laser à chaque foyer.
